Novas resinas Oligo dT para purificação e isolamento de mRNA: explorando nova tecnologia baseada em esferas magnéticas semeadas e resinas de estireno/DVB jateadas

O novo Sunresin Seplife ®A resina de afinidade Oligo dT foi projetada para a purificação e isolamento de mRNA de processos de fabricação de transcrição in vitro (IVT). Utilizando os 20 anos de experiência da Sunresin na fabricação de resinas especiais, projetamos uma tecnologia exclusiva que fabrica uma resina polimérica de 50 mícrons com tamanhos de partículas muito uniformes por meio do inchaço das sementes. A resina é uma resina de poliestireno divinilbenzeno reticulada funcionalizada com oligo dT20. A resina captura efetivamente o mRNA dos componentes do processo de reação de transcrição, como enzimas e DNA plasmídico.

Seplife ® Oligo dT foi projetado para atender à crescente demanda em seletividade, capacidade e purificação downstream em larga escala de uma variedade de construções de mRNA usadas em vacinas, como vacina mRNA COVID-19, vacinas oncológicas, vacinas contra AIDS, tratamento e prevenção de doenças raras e outras doenças importantes. Esta resina permite capturar seletivamente o mRNA através da cauda poliadenilada (poliA) usando sal simples (NaCl 0,5M) e etapas de purificação à base de água.

As principais características do Oligo dT combinam fácil purificação de mRNA da mistura bruta de transcrição para remover efetivamente o DNA plasmidial e outros componentes IVT, fluxo de trabalho simplificado graças à fácil adaptação a diferentes tipos de colunas e excelente escalabilidade. Obviamente, a resina foi projetada para apresentar excelente estabilidade a temperaturas de até 65°C e a álcalis para um CIP eficiente.

A tecnologia de resina exclusiva desenvolvida pela Sunresin permite a fabricação de lotes de resina de 50Kg, diminuindo assim o risco de variabilidade e a melhor capacidade de fabricação da categoria usando condições GMP e controles de controle de qualidade rigorosos.

A superfície das microesferas de resina é modificada – usando uma tecnologia proprietária – para se tornar mais hidrofílica, a fim de reduzir a adsorção inespecífica. Isto é conseguido pela adição de um ligante feito de um braço espaçador de cadeia longa, de modo que o impedimento estérico é reduzido, a taxa de transferência de massa é aumentada e a ligação dinâmica elevada é garantida. A superfície das esferas é então funcionalizada com poli(dT) para permitir a captura de mRNA através do emparelhamento de bases com a cauda poliA do mRNA.

Neste pôster apresentamos aplicações na purificação de mRNA de 1200nt usando Oligo dT usando captura e liberação sob condições padrão de purificação de mRNA. Além disso, o revestimento realizado na resina permite a redução do DNA plasmídico e de outros componentes da mistura de transcrição.

Apresentamos também as resinas magnéticas recentemente desenvolvidas funcionalizadas com oligo dT para fácil purificação e separação nas etapas de desenvolvimento de P&D. Estas esferas magnéticas partem de um núcleo de resina de poliestireno divinilbenzeno feito por uma tecnologia de semeadura exclusiva que permite fazer esferas monodimensionadas de 1 a 3 mícrons. Essas esferas são então revestidas com Fe3O4 e então totalmente revestidas com um invólucro de poliuretano que protege totalmente as esferas da liberação do material paramagnético.

Estas partículas magnéticas permitem a separação fácil e rápida do mRNA, melhorando assim o processo de desenvolvimento e triagem de novas terapias genéticas.