Novas resinas Oligo dT para purificação e isolamento de mRNA: explorando novas tecnologias baseadas em esferas magnéticas semeadas e resinas de estireno/DVB injetadas.

O novo Sunresin Seplife ®A resina de afinidade Oligo dT foi desenvolvida para a purificação e isolamento de mRNA em processos de transcrição in vitro (IVT). Com base em 20 anos de experiência na fabricação de resinas especiais, a Sunresin desenvolveu uma tecnologia exclusiva que produz uma resina polimérica de 50 micrômetros com tamanhos de partícula muito uniformes por meio do inchamento de sementes. A resina é composta por poliestireno divinilbenzeno reticulado funcionalizado com oligo dT20. Ela captura o mRNA de forma eficaz, separando-o de componentes do processo de transcrição, como enzimas e DNA plasmídico.

Seplife ®O Oligo dT foi desenvolvido para atender à crescente demanda por seletividade, capacidade e purificação em larga escala de uma variedade de construções de mRNA utilizadas em vacinas, como a vacina de mRNA contra COVID-19, vacinas oncológicas, vacinas contra AIDS, tratamento e prevenção de doenças raras e outras doenças importantes. Essa resina permite a captura seletiva do mRNA através da cauda poliadenilada (poliA) utilizando etapas simples de purificação com sal (0,5M NaCl) e água.

As principais características do Oligo dT combinam a fácil purificação de mRNA a partir da mistura de transcrição bruta com a remoção eficaz de DNA plasmídico e outros componentes da transcrição in vitro (IVT), um fluxo de trabalho simplificado graças à fácil adaptação a diferentes tipos de colunas e excelente escalabilidade. Além disso, a resina foi projetada para apresentar excelente estabilidade a temperaturas de até 65 °C e a álcalis, garantindo uma limpeza CIP eficiente.

A tecnologia exclusiva de resina desenvolvida pela Sunresin permite a fabricação de lotes de resina de 50 kg, diminuindo assim o risco de variabilidade e proporcionando as melhores capacidades de fabricação da categoria, utilizando condições de Boas Práticas de Fabricação (BPF) e rigorosos controles de controle de qualidade.

A superfície das microesferas de resina é modificada – utilizando uma tecnologia proprietária – para se tornar mais hidrofílica, a fim de reduzir a adsorção não específica. Isso é obtido pela adição de um ligante constituído por um espaçador de cadeia longa, reduzindo assim o impedimento estérico, aumentando a taxa de transferência de massa e garantindo uma alta afinidade de ligação. A superfície das esferas é então funcionalizada com poli(dT) para permitir a captura do mRNA por meio do pareamento de bases com a cauda poliA do mRNA.

Neste pôster, apresentamos aplicações na purificação de mRNA de 1200 nt utilizando Oligo dT com captura e liberação em condições padrão de purificação de mRNA. Além disso, o revestimento realizado na resina permite a redução do DNA plasmídico e de outros componentes da mistura de transcrição.

Apresentamos também as resinas magnéticas recentemente desenvolvidas, funcionalizadas com oligo dT para facilitar a purificação e a separação nas etapas de desenvolvimento de P&D. Essas microesferas magnéticas são feitas a partir de uma resina central de poliestireno-divinilbenzeno, produzida por uma tecnologia de semeadura exclusiva que permite a fabricação de microesferas monodispersas de 1 a 3 micrômetros. Essas microesferas são então revestidas com Fe3O4 e, em seguida, totalmente revestidas com uma camada de poliuretano que protege completamente as microesferas, impedindo a liberação do material paramagnético.

Essas partículas magnéticas permitem a separação fácil e rápida do mRNA, o que aprimora o processo de desenvolvimento e triagem de novas terapias genéticas.