Seplife SP ®Resina de Cromatografia FF Agarose

Resina de cromatografia em agarose  

SP seplife FF

Seplife SP ® Perfil do produto de resina de cromatografia FF Agarose:

Seplife SP ® FF  resina de cromatografia  é um novo altamente reticulado  resina de cromatografia em agarose  desenvolvido de forma independente pela Sunresin. É uma espécie de propil à base de ácido sulfônico ligado em  resina de cromatografia de filtração em gel de agarose . Resina forte de cromatografia de troca catiônica com alta vazão, baixa contrapressão, alta carga dinâmica, boa estabilidade química e propriedades mecânicas, baixa adsorção inespecífica, alta taxa de recuperação, aumento de escala conveniente, encurtando o tempo de produção e melhorando a produtividade. É amplamente utilizado em  separação de proteínas por troca iônica ,  ácidos nucleicos  e  peptídeos  a jusante de  biofarmacêutica e bioengenharia .

Seplife SP ® Parâmetros da resina de cromatografia FF Agarose:

Seplife SP ® Resina de Cromatografia FF Agarose Instrução de teste:

1. Embalagem de coluna
A embalagem é realizada de acordo com procedimentos operacionais padrão. Deve-se garantir que cada material esteja em temperatura operacional e que o gel precise ser desgaseificado antes de ser embalado.
2.Equilíbrio
Equilibre a coluna com 2 a 5 volumes de coluna da balança de carga, certificando-se de que a condutividade e o pH do efluente sejam exatamente iguais à condutividade e ao pH do tampão de carga.
A solução de equilíbrio é uma solução tampão de baixa concentração, tal como NaOAC, PBS e semelhantes. Uma solução de equilíbrio comumente usada é tampão acetato 0,1 mol/L, pH 5,0.
3. Carregamento de amostra
(1) A amostra é preparada com uma solução de equilíbrio e a amostra turva é centrifugada e filtrada para carregamento. Amostras com muita concentração de sal são processadas e depois dispensadas.
(2) Em geral, o produto alvo é combinado em uma coluna, as impurezas são lavadas com uma solução de equilíbrio e um eluente é selecionado para lavar o produto alvo.
(3) A extensão em que o meio adsorve os componentes da amostra depende da natureza carregada da amostra, da força iônica da fase móvel e do pH. A concentração de sal é pequena e o meio é adsorvido aos componentes da amostra com mais firmeza. Ao utilizar meio de cromatografia SP, o pH recomendado é 1 unidade acima do ponto isoelétrico do produto alvo.
4.Eluição
A eluição pode ser realizada aumentando a concentração de sal ou aumentando o pH, e geralmente aumentando a concentração de sal. Um eluente comumente usado (solução B), como: tampão acetato 0,1 mol/L + NaCl 2 mol/L, pH 5,0.
5.Regeneração
Geralmente, o tampão é lavado com uma alta concentração de sal (contendo 1 ~ 2 mol/L de NaCl) ou o pH é reduzido em 10 vezes ou mais e depois lavado com uma solução de equilíbrio da proteína ligada para equilibrar.
Se as proteínas ou lipídios inativados não forem removidos durante a regeneração, eles poderão ser removidos por limpeza no local (CIP).
6.CIP
(1) Para proteínas ligadas por ligação iônica, elas podem ser removidas com 0,5 a 1 volume de leito de coluna de NaCl 2 M.
(2) Para proteínas precipitadas, proteínas ou lipídios ligados hidrofobicamente, pode-se lavar primeiro com 1 volume de leito de coluna de NaOH 0,1 M e depois com uma solução tampão de equilíbrio até que o pH seja neutro.
(3) Para proteínas, lipídios, etc. fortemente ligados hidrofobicamente, lave com 4 a 10 vezes o volume do leito de etanol a 70% ou isopropanol a 30%. Observe que a concentração do solvente orgânico aumenta gradativamente de forma gradiente, caso contrário é fácil Criar bolhas.
7.Armazenamento
Selado e armazenado entre 4 e 30ºC (a solução de preservação é 20% de etanol + 0,2 mol / L de acetato de sódio), local seco, ventilado, limpo, não pode ser congelado;
A coluna usada é armazenada a 4 ~ 8 ºC, solução de etanol a 20% + 0,2 mol /L de acetato de sódio.

Seplife SP ® Resina de Cromatografia FF Agarose Cuidado:

(1) Seleção de coluna: Teoricamente, desde que a coluna seja longa o suficiente, a resolução ideal pode ser obtida, mas como a vazão da coluna está relacionada ao gradiente de pressão, o comprimento da coluna aumenta para diminuir a vazão, o pico torna-se mais amplo e a resolução diminui; o diâmetro da coluna aumenta, causando um aumento na não uniformidade do fluxo líquido e uma diminuição significativa na resolução.
(2) O pH e a força iônica do tampão de eluição devem ser rigorosamente controlados durante o processo de purificação. A cromatografia em coluna deve ser realizada após a amostra e o meio de cromatografia SP deve ser completamente equilibrado com o tampão de eluição.
(3) O leito da coluna deve ser plano, sem ranhuras e bolhas de ar, caso contrário deverá ser reembalado.
(4) A vazão deve ser rigorosamente controlada durante o processo de eluição e não muito rápida.
(5) O volume da amostra deve ser pequeno e a concentração não deve ser muito alta.
(6) Durante o carregamento e todo o processo de eluição, a superfície do cilindro é impedida de secar.