CM Seplife ®Resina de Cromatografia FF Agarose

Resina de cromatografia em agarose  

CM seplife FF

CM Seplife ® Perfil do produto de resina de cromatografia FF Agarose:

CM seplife ® O meio de cromatografia FF é um novo tipo de meio de cromatografia em agarose altamente reticulado desenvolvido independentemente pela Sunresin. É um cátion fraco formado pela ligação de grupos carboximetila ao meio de cromatografia de filtração em gel de agarose.  Meio de cromatografia de troca iônica . Possui alta vazão, baixa contrapressão, alta carga dinâmica, boa estabilidade química e propriedades mecânicas, baixa adsorção inespecífica, alta taxa de recuperação, fácil de aumentar, pode reduzir o tempo de produção e melhorar a eficiência da produção. Amplamente utilizado em  purificação por cromatografia de troca iônica  de proteínas a jusante,  ácidos nucleicos  e  peptídeos  em  biofarmacêutica e bioengenharia .

CM Seplife ® Parâmetros da resina de cromatografia FF Agarose:

CM Seplife ® Instrução de teste de resina de cromatografia FF Agarose:

1. Embalagem de coluna
Operação de embalagem de acordo com procedimentos operacionais padrão. Deve-se garantir que cada material esteja em temperatura de trabalho e que o gel precise ser desgaseificado antes da embalagem.
2. Equilíbrio
Equilibre a coluna com 2 a 5 vezes o volume do leito da solução de equilíbrio de carga. Certifique-se de que a condutividade e o pH do efluente sejam exatamente iguais à condutividade e ao pH do tampão de carga. A solução de equilíbrio é uma solução tampão de baixa concentração, como Tris, PBS, etc.
3.carregando
(1) A amostra é preparada com a solução de equilíbrio, e a amostra turva deve ser centrifugada e filtrada antes do carregamento. Amostras com muita concentração de sal são preparadas após o processamento.
(2) Geralmente, o produto alvo é ligado à coluna, as impurezas são removidas com a solução de equilíbrio e, em seguida, o eluente é selecionado para lavar o produto alvo.
(3) O grau em que o meio adsorve os componentes da amostra depende das propriedades carregadas da amostra, da força iônica da fase móvel e do valor do pH. A concentração de sal é pequena e o meio adsorve os componentes da amostra com mais firmeza. Ao usar meio de cromatografia CM, o valor de pH recomendado é 1 unidade maior que o ponto isoelétrico do produto alvo.
4.Eluição
Aumente a concentração de sal ou aumente o valor do pH para eluição, comumente usado para aumentar a concentração de sal.
5.Regeneração
Geralmente, primeiro lave com um tampão de alta concentração de sal (contendo 1 ~ 2 mol / L de NaCl) ou reduza o pH em mais de 10 vezes o volume da coluna e, em seguida, lave até o equilíbrio com a solução de equilíbrio ao ligar a proteína.
Se houver proteínas ou lipídios inativados que não possam ser eliminados durante a regeneração, eles poderão ser removidos com CIP.
6. Limpeza no local
(1) Para a proteína ligada por ligação iônica, ela pode ser removida em 0,5 ~ 1 vezes o volume do leito de NaCl 2M.
(2) Para proteínas precipitadas, proteínas ou lipídios ligados hidrofobicamente, você pode primeiro enxaguar com volume de leito 1M de NaOH 0,1M e depois lavar com solução tampão de equilíbrio até que o pH seja neutro.
(3) Para proteínas e lipídios com forte ligação hidrofóbica, lave com 4 a 10 vezes o volume do leito de etanol 70% ou álcool isopropílico 30%. Deve-se notar que a concentração do solvente orgânico aumenta gradativamente de forma gradiente, caso contrário é fácil gerar bolhas.
7.Armazenamento
Selado e armazenado entre 4 e 30ºC (a solução de preservação é 20% de etanol) em local seco, ventilado, limpo e não pode ser congelado; as colunas usadas são armazenadas em solução de etanol a 4~8°C a 20%.
8. Transporte
Evite luz solar, chuva e forte pressão durante o transporte, sendo estritamente proibido transportar materiais tóxicos e nocivos.

CM Seplife ® Assuntos de resina de cromatografia FF Agarose que precisam de atenção:

(1) Seleção de coluna: Em teoria, desde que a coluna seja longa o suficiente, você pode obter a resolução ideal, mas como a vazão da coluna está relacionada ao gradiente de pressão, aumentar o comprimento da coluna torna a vazão mais lenta, o pico amplia e resolução diminui; o diâmetro da coluna aumenta, de modo que a irregularidade do fluxo de líquido aumenta e a resolução diminui significativamente. A
(2) O pH e a força iônica do tampão de eluição devem ser rigorosamente controlados durante o processo de purificação. A amostra e o meio de cromatografia CM devem ser completamente equilibrados com tampão de eluição antes da cromatografia em coluna. A
(3) O leito da coluna instalado deve ser plano e livre de canais e bolhas, caso contrário deverá ser reinstalado.
(4) A vazão deve ser rigorosamente controlada durante a eluição e não muito rápida.
(5) O volume da amostra deve ser pequeno e a concentração não deve ser muito alta.
(6) Evite que o cilindro seque durante a adição da amostra e todo o processo de eluição.