Eluição e Regeneração

Quando o meio cromatográfico estiver esgotado, ele deverá ser eluído. O princípio básico é dessorver o produto alvo por um íon ou grupo mais ativo. Diferentes sorventes são diferentes em suas atividades. Portanto, um eluente adequado deve ser selecionado para eluir a proteína do  meio de cromatografia .

Existem aproximadamente três maneiras de eluir a cromatografia de troca iônica:
Um é para eluição simultânea. O eluente é uma solução diluída de ácido, álcali ou sal, e um solvente orgânico apropriado também pode ser usado, em que a solução salina é usada principalmente, e a forma farmacêutica de acordo com a natureza do produto alvo e o produto final é selecionado. Como a substância a ser absorvida muitas vezes não é de uma única espécie, a carga de cada substância é diferente e a força de ligação ao meio é diferente. Mesmo que o mesmo eluente seja usado, a substância facilmente substituível fluirá primeiro do meio e a força de ligação será forte. Após a descarga do material, desde que coletado por fracionamento, diversas substâncias podem ser separadas para obter um produto relativamente puro. Este método é frequentemente utilizado para separação quando o desempenho do produto alvo é bem compreendido, ou para separação de espécies analíticas.

A segunda é uma eluição gradual, ou seja, eluição com diferentes concentrações de solução salina. Meio de separação Durante o processo de adsorção de troca, uma variedade de proteínas são adsorvidas. Se for utilizada uma condição de eluição constante, por vezes não é possível separar adequadamente todos os componentes, sendo necessário alterar as condições de eluição. Pode ser uma mudança gradual, ou seja, diferentes eluentes ou eluentes com diferentes valores de pH são utilizados para eluição em etapas, e diferentes picos de eluição podem ser obtidos de acordo com diferentes concentrações de eluentes e diferentes acidez. Isto é, uma concentração de sal pode obter uma proteína alvo, e diferentes concentrações de sal podem obter diferentes proteínas alvo. Este método de eluição passo a passo é adequado para a separação de proteínas de natureza conhecida, especialmente para produção em escala, fácil de operar e fácil de controlar.

O terceiro tipo é uma eluição gradiente contínua, ou seja, alterando a força iônica ou pH do eluato de acordo com uma certa mudança linear (geralmente apenas em um caso especial usando um método de eluição que altera o pH), no processo de classificação do eluente No processo, diferentes proteínas são substituídas uma por uma para obter vários componentes proteicos e, ao mesmo tempo, as proteínas geralmente não têm cauda. A eluição gradiente é o método de eluição mais comumente usado em cromatografia de troca iônica e também é o método de eluição com a capacidade de eluição mais forte, que é adequado para eluição de componentes semelhantes com propriedades de carga semelhantes.

No processo de eluição, pode ser utilizada eluição concomitante ou eluição em contracorrente. A eluição cocorrente também é chamada de eluição direta, ou seja, a direção do fluxo do eluente é a mesma que a direção do fluxo do fluido de trabalho, e a eluição em contracorrente também é chamada. Para a eluição reversa, a direção do fluxo do eluente é oposta na direção do fluxo do fluido de trabalho. Se o líquido de alimentação for trocado e adsorvido de cima para baixo através da coluna de troca, a concentração do adsorbato na camada superior da coluna de troca é maior do que a da camada inferior, e a dessorção reversa do eluato do de baixo para cima pode atingir o objetivo de eluição com mais eficiência. No entanto, uma vez que a operação de eluição reversa é muito mais complicada do que a eluição direta, baseia-se principalmente na eluição positiva.

A taxa de fluxo do eluente também afeta a separação da cromatografia de troca iônica, e a taxa de eluição é geralmente mantida constante. Em geral, a resolução da eluição lenta é melhor do que a da eluição rápida, mas a taxa de eluição é muito lenta, o que causará um longo tempo de separação, efeitos colaterais como difusão da amostra, alargamento do pico do espectro e resolução reduzida, por isso depende sobre a situação real. Escolha a taxa de eluição apropriada. Se os picos de eluição estiverem relativamente concentrados em uma determinada área para causar sobreposição, a faixa de gradiente deverá ser reduzida adequadamente ou a velocidade de eluição deverá ser reduzida para aumentar a resolução. Se a resolução for boa, mas o pico de eluição for muito amplo, a taxa de eluição deverá ser aumentada adequadamente.