Solução tampão

O pH é um fator importante no funcionamento da cromatografia de troca iônica, e a estabilização e as alterações do pH são geralmente obtidas com soluções tampão; portanto, a escolha da solução tampão é um fator importante que afeta a separação.

Na seleção de uma solução tampão, o pH e a força iônica são dois fatores-chave que afetam não apenas a separação do produto desejado das impurezas, mas também o rendimento do produto. O pH escolhido depende do ponto isoelétrico, da estabilidade e da solubilidade do produto desejado, não só para tornar o material separado um íon passível de troca iônica, mas também para manter sua alta atividade. O valor de pK do trocador iônico também deve ser considerado.

Como o próprio buffer está carregado, ele também é combinado com o  meio de cromatografia de troca iônica Essa combinação causará dois tipos de interferência: por um lado, reduzirá a concentração do tampão, diminuindo assim a capacidade tamponante; por outro lado, haverá troca com o meio de separação, competindo com a proteína pela capacidade de troca do meio. Portanto, ao usar meios de cromatografia de troca aniônica, evite o uso de tampões com carga negativa, como o fosfato. Ao usar meios de cromatografia de troca catiônica, evite o uso de tampões com carga positiva, como o Tris.

Devido aos diferentes tipos de meios de separação, o processo inicial é ligeiramente diferente. Em circunstâncias normais, quando se utiliza um meio de cromatografia de troca aniônica, o tampão inicial apresenta um pH 0,5 a 1 superior ao ponto isoelétrico da proteína alvo; já quando se utiliza um meio de troca catiônica, o tampão inicial apresenta um pH 0,5 a 1 inferior ao ponto isoelétrico da proteína alvo.