Solução tampão

O pH é um fator importante na operação da cromatografia de troca iônica, e a estabilização e as alterações do pH geralmente são obtidas com tampões, portanto, a escolha do tampão é um fator importante que afeta a separação.

Ao selecionar um tampão, o pH e a força iônica são dois fatores-chave que afetam não apenas a separação do produto alvo das impurezas, mas também o rendimento do produto. O pH escolhido depende do ponto isoelétrico, estabilidade e solubilidade do produto alvo, não apenas para tornar o material separado um íon que pode ser trocado, mas também para manter sua alta atividade. O valor pK do trocador de íons também deve ser considerado.

Como o próprio buffer é carregado, ele também é combinado com o  meio de cromatografia de troca iônica . Essa combinação causará dois tipos de interferência, por um lado, reduzindo a concentração do tampão, reduzindo assim a capacidade de tamponamento; por outro lado, ele é trocado com o meio de separação para competir com a proteína pela capacidade de troca do meio. Portanto, ao usar meios de cromatografia de troca aniônica, evite usar tampões carregados negativamente, como fosfato. Ao usar meios de cromatografia de troca catiônica, evite usar tampões carregados positivamente, como Tris.

Devido aos diferentes tipos de meios de separação, o processo inicial é ligeiramente diferente. Em circunstâncias normais, quando meios de cromatografia de troca aniônica são usados, o tampão inicial é maior que o ponto isoelétrico da proteína alvo em 0,5-1 pH; usando uma camada de troca catiônica Quando o meio é analisado, o tampão inicial é menor que o ponto isoelétrico da proteína alvo em 0,5 a 1 pH.