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Solução de buffer

O pH é um fator importante na operação da cromatografia de troca iônica, e a estabilização e as mudanças do pH são geralmente obtidas com tampões, portanto a escolha do tampão é um fator importante que afeta a separação.

Ao selecionar um tampão, o pH e a força iônica são dois fatores-chave que afetam não apenas a separação do produto alvo das impurezas, mas também o rendimento do produto. O pH escolhido depende do ponto isoelétrico, estabilidade e solubilidade do produto alvo, não só para fazer do material separado um íon que pode ser trocado, mas também para manter sua alta atividade. O valor pK do trocador de íons também deve ser considerado.

Uma vez que o próprio buffer é carregado, ele também é combinado com omeio de cromatografia de troca iônica. Essa combinação causará dois tipos de interferência, por um lado, reduzindo a concentração do buffer, reduzindo assim a capacidade de buffer; por outro lado, é trocado com o meio de separação para competir com a proteína pela capacidade de troca do meio. Portanto, ao usar meio de cromatografia de troca aniônica, evite usar tampões carregados negativamente, como fosfato. Ao usar meio de cromatografia de troca catiônica, evite usar tampões carregados positivamente, como Tris.

Devido aos diferentes tipos de meios de separação, o processo inicial é um pouco diferente. Em circunstâncias normais, quando o meio de cromatografia de troca aniônica é usado, o tampão inicial é mais alto do que o ponto isoelétrico da proteína alvo em 0,5-1 pH; usando uma camada de troca catiônica Quando o meio é analisado, o tampão inicial é menor que o ponto isoelétrico da proteína alvo em 0,5 a 1 pH.

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