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Eluição e Regeneração

Quando o meio cromatográfico se esgota, ele deve ser eluído. O princípio básico é dessorver o produto alvo por um íon ou grupo mais ativo. Diferentes sorventes são diferentes em sua atividade. Portanto, um eluente adequado deve ser selecionado para eluir a proteína demeio de cromatografia.

Existem aproximadamente três maneiras de eluir a cromatografia de troca iônica:
Um é para eluição simultânea. O eluente é um ácido diluído, solução alcalina ou salina pode ser usada, e um solvente orgânico apropriado também pode ser usado, em que a solução salina é usada principalmente e a forma de dosagem de acordo com a natureza do produto alvo e o produto final é selecionado. Como a substância a ser absorvida geralmente não é uma única espécie, a carga de cada substância é diferente e a força de ligação ao meio é diferente. Mesmo se o mesmo eluente for usado, a substância facilmente substituída fluirá para fora do meio primeiro, e a força de ligação é forte. Após o descarte do material, desde que seja coletado por fracionamento, várias substâncias podem ser separadas para se obter um produto relativamente puro. Este método é frequentemente usado para separação quando o desempenho do produto alvo é bem compreendido, ou para separação de espécies analíticas.

A segunda é uma eluição gradual, ou seja, eluição com diferentes concentrações de solução salina. Meio de separação Durante o processo de adsorção de troca, uma variedade de proteínas são adsorvidas. Se uma condição de eluição constante for usada, às vezes não é possível separar adequadamente todos os componentes, e é necessário alterar as condições de eluição. Pode ser uma mudança gradual, ou seja, diferentes eluentes ou eluentes com diferentes valores de pH são usados ​​para eluição em estágios, e diferentes picos de eluição podem ser obtidos de acordo com diferentes concentrações de eluentes e diferentes acidez. Ou seja, uma concentração de sal pode obter uma proteína alvo e diferentes concentrações de sal podem obter diferentes proteínas alvo. Este método de eluição passo a passo é adequado para a separação de proteínas de natureza conhecida, especialmente para produção em escala, fácil de operar e fácil de controlar.

O terceiro tipo é uma eluição de gradiente contínuo, ou seja, alterando a força iônica ou pH do eluato de acordo com uma certa mudança linear (geralmente apenas em um caso especial usando um método de eluição que altera o pH), no processo de graduação do eluente No processo, diferentes proteínas são substituídas uma por uma para obter vários componentes proteicos e, ao mesmo tempo, as proteínas geralmente não apresentam cauda. A eluição de gradiente é o método de eluição mais comumente usado em cromatografia de troca iônica e também é o método de eluição com a capacidade de eluição mais forte, que é adequado para eluição de componentes semelhantes com propriedades de carga semelhantes.

No processo de eluição, pode ser usada a eluição em co-corrente ou a eluição em contracorrente. A eluição em co-corrente também é chamada de eluição direta, ou seja, a direção do fluxo do eluente é a mesma que a direção do fluxo do fluido de trabalho, e a eluição em contracorrente também é chamada de eluição reversa, a direção do fluxo do eluente é oposta para a direção do fluxo do fluido de trabalho. Se o líquido de alimentação for trocado e adsorvido de cima para baixo através da coluna de troca, a concentração do adsorvato na camada superior da coluna de troca é maior do que a da camada inferior e a dessorção reversa do eluato do de baixo para cima pode atingir o propósito de eluição com mais eficiência. No entanto, uma vez que a operação de eluição reversa é muito mais complicada do que a eluição direta, é principalmente baseada na eluição positiva.

A taxa de fluxo do eluente também afeta a separação da cromatografia de troca iônica, e a taxa de eluição é geralmente mantida constante. Em geral, a resolução da eluição lenta é melhor do que a da eluição rápida, mas a taxa de eluição é muito lenta, o que causará um longo tempo de separação, efeitos colaterais como difusão da amostra, alargamento do pico do espectro e resolução reduzida, portanto depende sobre a situação real. Escolha a taxa de eluição apropriada. Se os picos de eluição estiverem relativamente concentrados em uma determinada área para causar sobreposição, a faixa de gradiente deve ser reduzida apropriadamente ou a velocidade de eluição deve ser diminuída para aumentar a resolução. Se a resolução for boa, mas o pico de eluição for muito amplo, a taxa de eluição deve ser aumentada apropriadamente.

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